来源:Plants 发布时间:2021/4/16 18:11:51
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MDPI Plants 拟南芥中参与光保护qH的基因筛选

论文标题:A Genetic Screen to Identify New Molecular Players Involved in Photoprotection qH in Arabidopsis thaliana(拟南芥中参与光保护qH的基因筛选)

期刊:Plants

作者:Pierrick BruOrcID, Sanchali Nanda and Alizée Malnoë

发表时间:1 October 2020

DOI:10.3390/plants9111565

微信链接:https://mp.weixin.qq.com/s?biz=MzI1MzEzNjgxMQ==&mid=2649984880&idx=

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期刊链接:https://www.mdpi.com/journal/plants

光合作用是一种将光能转化为化学能的生物过程,它能为植物生长提供能量。然而,光合作用也是植物中具有破坏性的活性氧 (ROS) 的来源。因此,植物进化出了光保护机制,如非光化学猝灭 (NPQ),来限制其光合作用过程,以避免ROS对细胞的损害。光保护的研究对于我们了解其分子机制,为植物改良寻找新的途径具有重要意义。经甲基磺酸乙酯 (EMS) 诱变后拟南芥的全基因组测序结果分析,研究人员确定了可能参与光保护qH的新基因。

来自瑞典优密欧大学的Pierrick Bru等人在Plants期刊上发表了文章,发现了参与拟南芥NPQ的qI型猝灭 (qH) 的候选基因。

soq1 npq4 gl1 上150个突变体的筛选

作者对M2选育的突变体进行种子繁殖和NPQ表型验证,并从中选择了150个突变体。与亲本soq1 npq4 gl1相比,这些突变体表现出不同的NPQ表型,如NPQ高或低、Fv/Fm和/或色素沉着不同。接着,作者将表型恢复到npq4突变体的原始NPQ表型,或表现出结构性低FM且没有明显色素缺陷的突变体,与亲本soq1 npq4 gl1回交。通过这种测序作图的方法,作者鉴定出突变体lcnp、chlorina1 (cao 突变体) 和roqh1[1,2]。最后,作者根据NPQ表型对所选突变体进行了分类。

图 1. 鉴定参与qI型猝灭过程的新基因

“低NPQ”、“高NPQ”和“快松弛”三类突变体

作者对96个突变体进行测序,选取M3突变体进行培养,并通过叶绿素荧光成像对Fo、Fm、Fv/Fm和NPQ进行重新表型鉴定,以确认M2代的表型。上述操作可将“低NPQ”、“高NPQ”和“快松弛”三类突变体和其他突变体区分开来。一类显示较低的NPQ水平,另一类显示较高的NPQ水平,第三类的NPQ表型类似于soq1 npq4,但放松更快。蓝色的“较低NPQ”大约占突变体总数的56%,橙色的“较高NPQ”类别约占32%,绿色的“较快松弛”类别约占突变总数的11%。

图 2. 三种突变体的分布

正常绿色、低NPQ和低Fv/Fm

soq1 npq4相比,池6和池14的36号、39号突变体在强光10分钟后的NPQ诱导降低了约33%。光合参数Fv/Fm,Fo为0.49和0.47,257±13和264±8,而soq1 npq4的Fv/Fm和Fo分别为0.79和108±6。与soq1 npq4相比,视觉叶片色素沉着为正常绿色到略淡绿色。与soq1 npq4的3.0相比,36号和39号突变体的Chl a/b略低为2.7,但总体上Chl含量与对照相似。36号和39号突变体表现出相似的Fv/Fm、Fo和NPQ,但它们来自不同的池,可能是NPQ表型的等位基因。

图 3. 正常绿色,低NPQ和高F0引起低Fv/Fm的拟南芥等位基因突变体

浅绿色、低NPQ和低Fv/Fm突变类

作者用上述相同的处理方法,发现池6和池14的37号和245号突变体的NPQ诱导率降低了约50%,出现了明显的色素缺陷。突变体的Chl a/b比值异常,分别为7.2和6.9,而soq1 npq4为3.1。此外,与soq1 npq4相比,37号和245号的叶绿素含量分别下降了70%和67%,接近于淡绿色par优良突变体clina1-1 (与野生型相比) 的75%的叶绿素含量下降[3]。与soq1 npq4相比,光合参数Fo值和Fm值也受到较低的Fm和较高的Fo值的影响。这种较低的Fm值和较高的Fo值导致较低的Fv/Fm值,分别为0.55和0.59,而soq1 npq4的Fv/Fm值为0.79。来自不同池的37号和245号突变体的NPQ、Fo、Fm和Fv/Fm表型相似,可能是NPQ表型的等位基因。Chl表型也非常相似,可能与NPQ表型相关。

图 4. 淡绿色,低NPQ和低Fv/Fm的拟南芥等位基因突变体

浅绿色、高NPQ和正常Fv/Fm突变类

作者还发现,在相同的实验步骤中,12池和9池的73号和251号突变体NPQ诱导增强了约40%,也出现了明显的色素缺陷。突变体251号完全发育的叶片Chl a/b比值与野生型相同为3.1,但Chl含量下降了45%。第251号幼叶表现出更强烈的淡绿色表型,随着叶龄的增加,这种表型趋于消失。突变体73的Chl a/b比略低,为2.8,Chl含量降低了60%。与soq1 npq4相比,突变体光合作用参数Fo和Fm较低,但导致野生型的Fv/Fm值为0.8。来自不同池的73号和251号突变体的NPQ、Fo、Fm、Fv/Fm表型相似。突变体之间Chl表型的轻微差异可能是由于等位基因较弱和较强所致。

图 5. 淡绿色,高NPQ和正常Fv/Fm的拟南芥等位基因突变体

Pierrick Bru教授等人发现的三类突变体,与对照相比,都表现出部分或全部光合参数(Fo、Fm、Fv/Fm和NPQ)和色素含量的差异。这三组突变是潜在的等位基因的突变,确定它们的特征能有效的帮助我们识别致病突变。未来还应进一步探索可能发生突变并且可以观察到表型的基因。

参考文献

1. Baker, N.R. Photoinhibition of Photosynthesis. In Light as an Energy Source and Information Carrier in Plant Physiology; NATO ASI Series; Jennings, R.C., Zucchelli, G., Ghetti, F., Colombetti, G., Eds.; Springer: Boston, MA, USA, 1996; pp. 89–97. ISBN 978-1-4613-0409-8.

2. Amstutz, C.L.; Fristedt, R.; Schultink, A.; Merchant, S.S.; Niyogi, K.K.; Malnoë, A. An atypical short-chain dehydrogenase–reductase functions in the relaxation of photoprotective qH in Arabidopsis. Nat. Plants 2020, 6, 154–166.

3. Yamasato, A.; Nagata, N.; Tanaka, R.; Tanaka, A. The N-terminal domain of chlorophyllide a oxygenase confers protein instability in response to chlorophyll b accumulation in Arabidopsis. Plant Cell 2005, 17, 1585–1597.

Plants (ISSN 2223-7747, IF 2.762) 是国际开放获取学术期刊,期刊发文范围涵盖植物科学相关的各个方面,重点刊载植物生理学、形态学、系统学和生态学等基础学科的研究文章和综述等,该期刊同样欢迎应用植物科学领域所有类型的文章。Plants目前已被SCIE、Scopus、PubMed等重要数据库收录。期刊采用单盲同行评审制,一审周期平均约为12.3天,文章从接收到发表上线平均仅需2.9天。

 
 
 
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