论文标题：On-Site and Visual Detection of the H5 Subtype Avian Influenza Virus Based on RT-RPA and CRISPR/Cas12a

论文链接：https://doi.org/10.3390/v16050753

期刊名：Viruses

期刊主页：https://www.mdpi.com/journal/viruses

研究背景

禽流感是一种严重威胁人畜健康的病毒性疾病，其中H5亚型病毒更是令人关注的重点。及时准确检测H5亚型病毒对于疫情防控至关重要。然而，传统的检测方法通常需要复杂的仪器设备和专业实验室，难以在现场快速应用。因此，亟需开发更加简便快捷的检测技术。

近日，来自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室的研究人员在 Viruses 期刊特刊“CRISPR/Cas in Viral Research 2024”上报告了一种基于RT-RPA和CRISPR/Cas12a的快速检测H5亚型禽流感病毒的新方法。在这项研究中，作者成功开发并验证了RT-RPA/CRISPR检测方法，证明了其对H5亚型AIV的特异性、灵敏性、便携性和快速检测的功效。这种创新方法不仅在速度和灵敏度方面比传统诊断方法有了显着改进，而且还引入了能够现场应用的便携式解决方案。RT-RPA/CRISPR 在现场立即部署的潜力凸显了其作为早期监测和控制H5亚型AIV疫情的强大工具的价值。通过实现早期检测，该检测有助于及时采取干预策略，以减轻H5病毒的传播，从而为公共卫生和生物安全做出重大贡献。

RT-RPA/CRISPR这种检测方法利用逆转录重组酶聚合酶扩增 (RT-RPA) 和CRISPR/Cas12a的检测原理。在该检测系统中，通过RT-RPA对提取的核酸中的目标基因片段进行扩增。然后，目标DNA被特异性crRNA识别，并与Cas12a形成三元复合物，顺式切割目标DNA，Cas12a无差别地反式切割ssDNA探针 (5’-FAM-TTATT-3’-BHQ1-标记) 或 (5’-FAM-TTATT-3’-生物素标记) 在反应系统中。检测结果以荧光值、蓝光、侧流试纸条三种方式呈现。

这项技术具有以下特点：

1. 高灵敏度和特异性：该方法能在较短时间内准确检测出H5亚型病毒，检测阈值为1.9 copies/μL (blue light)和 1.9 × 10³ copies/μL (lateral flow strips)。

2. 简便可操作：无需复杂仪器，只需简单的设备就可在现场直接进行检测，大大提高了应用便利性。

3. 可视化检测：采用CRISPR/Cas12a技术，检测结果可通过肉眼观察的方式直观判断，无需专业仪器分析。

4. 广泛应用前景：该技术可广泛应用于禽流感疫情监测和快速诊断，有助于及时采取防控措施。

研究结论

在这项研究中，作者成功开发并验证了RT-RPA/CRISPR检测方法，证明了其对H5亚型AIV的特异性、灵敏性、便携性和快速检测的功效。这种创新的方法不仅在速度和灵敏度方面比传统诊断方法有了显着改进，而且还引入了能够现场应用的便携式解决方案，这凸显了其作为早期监测和控制H5亚型AIV疫情的强大工具的价值。这项创新性的检测技术有助于及时采取干预策略，以减轻H5病毒的传播，为禽流感防控注入了新动力，必将在未来的疫情监测和早期诊断中发挥重要作用，从而为公共卫生和生物安全做出重大贡献。期待这一技术在实际应用中取得更大突破，为维护人畜健康做出贡献。

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https://www.mdpi.com/si/188851

Viruses 期刊介绍

主编：Eric O. Freed, Center for Cancer Research, National Cancer Institute, USA

涵盖人类病毒和病毒疾病，动物病毒，植物病毒，病毒免疫、疫苗和抗病毒药物以及朊病毒等各方面研究，目前已被 SCIE (Web of Science)、MEDLINE (PubMed) 等数据库收录。