论文标题：Ex Vivo Immune Function and Modulatory Effects of Calcitriol in Dogs with Naturally Occurring Diabetes Mellitus

论文链接：https://doi.org/10.3390/vetsci11050193

期刊名：Veterinary Sciences

期刊主页：https://www.mdpi.com/journal/vetsci

1、研究背景

天然糖尿病 (NODM) 是犬类常见的内分泌紊乱疾病之一，与人类的1型糖尿病 (T1DM) 极为相似，发病率在宠物犬群体中约为0.2%至1.3%。研究发现，人类T1DM患者的免疫反应存在异常，这可能是导致多种长期并发症的重要因素。然而，犬类NODM的免疫功能研究相对较少。维生素D缺乏在糖尿病患者中较为常见，其对免疫系统具有多种积极影响，补充维生素D对人类T1DM患者有益。尽管犬类的免疫系统也受维生素D影响，但目前尚无研究探讨其对糖尿病犬的效果。基于此，来自美国中西大学兽医学院Jared A. Jaffey教授在 Veterinary Sciences 期刊发表的文章，系统地评估了犬类NODM的免疫功能特征，并探讨骨化三醇 (维生素D的活性代谢物) 在糖尿病犬中的免疫调节作用。

2、研究内容

•研究对象与设计

本研究为前瞻性病例对照研究，共纳入20只糖尿病犬 (10只临床控制良好，10只未控制) 和20只健康非糖尿病犬作为对照组。研究通过电子邮件招募和电子病历筛选相结合的方式，对糖尿病犬的临床控制状态、年龄、性别、体重等进行详细记录，并排除肥胖、近期接种疫苗及患有其他疾病的犬只。

•血样采集与处理

从每只犬只采集6 mL血液样本，分别与骨化三醇 (10−7 M) 或乙醇 (对照) 共同孵育24小时。孵育后，样本被分为两部分，分别进行吞噬实验和白细胞细胞因子反应评估。

•细胞因子反应评估

孵育后的样本被刺激物 (脂多糖LPS、脂磷壁酸LTA或磷酸盐缓冲液PBS) 刺激，继续孵育24小时后收集上清液，使用犬特异性的多因子 bead-based 检测法测量肿瘤坏死因子 (TNF-α)、白细胞介素 (IL-6、IL-8、IL-10) 的浓度。

•吞噬功能评估

使用PhagoTest商业试剂盒评估吞噬功能。将孵育后的血液与FITC标记的调理化大肠杆菌共同孵育，通过流式细胞术测量吞噬细胞百分比和每细胞吞噬细菌数量。

•统计分析

采用商业软件进行数据分析，对非正态分布和正态分布的连续数据分别用中位数和均值表示。通过多层次混合效应广义线性回归模型 (MMEGLR) 分析白细胞细胞因子表达与糖尿病状态及暴露类型 (骨化三醇或乙醇) 之间的关系，并对吞噬功能进行类似评估。

3、研究内容

•犬类NODM的免疫功能异常

研究发现，与健康犬相比，糖尿病犬的白细胞产生更高浓度的IL-10、IL-6和IL-8。尽管TNF-α浓度在糖尿病犬中较高，但差异未达到统计学意义。这表明犬类NODM存在细胞因子失调，与人类糖尿病患者相似。这种失调可能与慢性高血糖引起的晚期糖基化终产物 (AGEs) 积累有关，AGEs可直接损伤蛋白质，加剧活性氧 (ROS) 形成，刺激促炎事件并改变细胞内信号传导。

•骨化三醇的免疫调节作用

骨化三醇对白细胞细胞因子产生有一定影响，可降低TNF-α和IL-8的上清浓度，同时增加IL-6浓度，但对IL-10无显著影响。然而，骨化三醇对糖尿病犬和对照犬的白细胞细胞因子反应无差异影响。在其他物种中，骨化三醇可增强免疫细胞对某些病原体的吞噬作用，但本研究未发现其对犬类NODM的吞噬功能有显著影响。这可能与不同物种对骨化三醇的免疫反应差异有关，也可能与本研究仅评估了针对大肠杆菌的吞噬功能有关。

•糖尿病控制状态对免疫功能的影响

研究还发现，糖尿病犬的临床控制状态 (基于多饮、多尿、多食症状的有无及胰岛素剂量调整情况) 并未显著影响所研究的免疫功能变量。这与人类研究结果不同，可能与本研究采用临床控制而非血糖控制的替代标志物 (如糖化血红蛋白) 有关。

4、研究意义与展望

本研究为犬类NODM的免疫治疗提供了新的思路，表明糖尿病犬存在免疫功能异常，且骨化三醇具有一定的免疫调节作用。未来研究可进一步探索犬类NODM的细胞因子特征，评估更广泛的免疫细胞功能，并寻找更准确的血糖控制标志物，以更好地理解糖尿病犬的免疫病理机制，开发更有效的治疗策略。

Veterinary Sciences 期刊介绍

主编：Patrick Butaye, Ghent University, Belgium; City University of Hong Kong, China

发表与兽医科学领域相关的原创研究文章、评论、通讯和简短说明，主题包括动物疾病、紊乱和损伤的预防、诊断和治疗。