作者:王方 来源:中国科学报 发布时间:2021/3/10 12:26:24
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江苏兽医所建立永生化猪气管上皮细胞感染模型

 

猪的呼吸道是多种病原微生物的定殖场所,猪原代气管上皮细胞(PTEC)是研究各种猪呼吸道病原发病机制的合适模型,但原代PTEC细胞短暂的寿命极大地限制了其应用前景。因此,构建永生化的猪气管上皮细胞具有较高的应用价值。

近日,江苏省农业科学院兽医研究所动物支原体感染与黏膜免疫防控技术创新团队针对永生化猪气管上皮细胞系的构建及应用完成研究论文,由《农业科学学报》(英文)优先在线发表。

研究人员比较原代与永生化细胞的上皮细胞表面标志物角蛋白18的表达、细胞周期、细胞生长曲线、端粒酶活性、染色体核型分析、端粒酶基因的蛋白质印记检测、软琼脂和裸鼠成瘤试验、增殖能力等相关基因的定量PCR检测,结果证实了永生化细胞具备了原代细胞的形态及功能特性,与原代PTECs相比,hTERT-PTEC也具有更长的寿命、更高的端粒酶活性和增殖活性。裸鼠体内未表现出恶性表型,表明该细胞系不具有致瘤性。

以猪肺炎支原体 (Mhp)、猪鼻支原体 (Mhr) 等猪源支原体为猪呼吸道的模式病原,将其感染hTERT-PTECs,通过颜色变化单位CCU50黏附率的定量计算,DNA拷贝定量实时PCR测定,间接免疫荧光测定和蛋白质印迹等试验分析表明,hTERT-PTECs对猪源支原体均易感,能够粘附不同毒力的Mhp菌株,且原代和永生化细胞之间的黏附能力无显著差异。总之,与原代PTECs类似,hTERT-PTECs可以用作猪源支原体的感染细胞模型,并可用于其他猪呼吸道病原体的感染研究。

该研究提供了详细的分离和培养原代PTEC的方法步骤。随后通过用含有人端粒酶逆转录酶(hTERT)的重组构建的质粒pEGFP-hTERT转染原代PTECs,通过两轮G418的抗性筛选,建立永生化的猪气管上皮细胞系(hTERT-PTECs),并可传代至60代以上。

相关论文信息:https://doi.org/10.1016/S2095-3119(21)63644-4

 
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